Разработка нового нанобиотехнологического метода и его применение для дифференциальной диагностики опухолей придаточного аппарата глаза

лет

предоставляем актуальную медицинскую информацию от ведущих специалистов, помогая врачам в ежедневной работе

Присоединяйтесь!

Личный кабинет

лет

Присоединяйтесь!

лет

Присоединяйтесь!

Разработка нового нанобиотехнологического метода и его применение для дифференциальной диагностики опухолей придаточного аппарата глаза

string(5) "77625"

Офтальмология Онкология

305

20 февраля 2024

ФГБУ «НМИЦ ГБ им. Гельмгольца» Минздрава России, Москва, Россия

ФИЦ Биотехнологии РАН, Москва, Россия

Цель исследования: создание и отработка нового нанобиотехнологического метода для применения его на практике с целью дифференциальной диагностики опухолей придаточного аппарата глаза.

Материал и методы: всего было исследовано 192 биопсийных материала опухолей века и конъюнктивы от 192 больных. Контролем служили образцы здоровой ткани из того же глаза. Для регистрации и получения значимых различий генерации биогенных наночастиц серебра in situ требовались подбор и оптимизация основных параметров проведения реакции восстановления катионов серебра. Для генерации de novo биогенных наночастиц серебра образцы исследуемых тканей помещали в стерильный раствор источника катионов в асептических условиях. Генерацию наночастиц проводили in situ с использованием стерильного раствора реактива Толленса (Ag(HN3)2NO3).

Результаты исследования: были установлены оптимальные значения параметров нового нанобиотехнологического метода для проведения реакции восстановления с формированием биогенных наночастиц серебра. Необходимая концентрация реактива Толленса (источника катионов) составила 63 мкг/мл, длина волны для наблюдения за формированием de novo биогенных наночастиц серебра равнялась λ=410 нм; для получения наиболее значимых изменений оптической плотности реакционной смеси с биогенными наночастицами требовалось от 10 до 20 мин, хотя первые изменения фиксировали с 5-й минуты реакции восстановления. Доброкачественные и злокачественные опухоли имели разную метаболическую активность: доброкачественные опухоли век и конъюнктивы восстанавливали катионы медленнее, чем злокачественные новообразования. Показатели восстановительной способности доброкачественных опухолей придаточного аппарата глаза не имели существенных отличий друг от друга в зависимости от локализации опухоли и типа. Среди злокачественных опухолей конъюнктивы наибольшая восстановительная способность обнаружена у меланомы (p<0,05). Среди злокачественных опухолей век не выявили существенных различий для разных типов опухоли.

Заключение: новый нанобиотехнологический метод позволяет проводить дифференциальную диагностику между доброкачественными и злокачественными опухолями придаточного аппарата глаза. Практическая ценность метода заключается в установлении доброкачественного или злокачественного характера роста опухоли с целью планирования тактики ведения пациента и объема хирургического вмешательства.

Ключевые слова: опухоль, веки, конъюнктива, наночастицы серебра, биогенный синтез, экспресс-диагностика, офтальмоонкология.

S.V. Saakyan¹, D.A. Skladnev², A.P. Alekseeva¹, O.V. Beznos¹, V.V. Sorokin²

¹Helmholtz National Medical Research Center, Moscow, Russian Federation

²Federal Research Center "Fundamental Basis of Biotechnology", Moscow, Russian Federation

Aim: to develop a new nanobiotechnology method for the differential diagnosis of ocular adnexal tumors.

Patients and Methods: 192 eyelid or conjunctival tumor samples from 192 patients were examined. Controls were healthy tissue samples from the same eye. To register and obtain significant differences in the generation of biogenic silver nanoparticles in situ, the key parameters of the reaction of the reduction of silver cations were selected and optimized. To generate de novo biogenic silver nanoparticles, tissue samples were placed in a sterile solution of a cation source in aseptic conditions. Nanoparticles were generated in situ using a sterile solution of Tollens' reagent (Ag(HN3)2NO3).

Results: the optimal parameters of a new nanobiotechnology method were established to conduct the reduction reaction to generate biogenic silver nanoparticles. The required concentration of Tollens' reagent (source of cations) was 63 μg/ml. The wavelength used to observe the de novo generation of biogenic silver nanoparticles (λ) was 410 nm. Obtaining the most significant changes in the optical density of the reaction mixture with biogenic nanoparticles required 10 to 20 min, although the first changes were documented starting from the 5th minute of the reduction reaction. Benign and malignant tumors are characterized by different metabolic activities, i.e., benign eyelid and conjunctival tumors reduce cations more slowly than malignant tumors. The parameters of reducibility of benign ocular adnexal tumors did not significantly differ depending on tumor location and type. Among the malignant conjunctival tumors, melanoma is characterized by the highest reducibility p<0.05). Among the malignant eyelid tumors, no significant differences were found for different tumor types.

Conclusions: this novel nanobiotechnology method provides a differential diagnosis of benign and malignant ocular adnexal tumors. The practical relevance of this method lies in differentiating benign and malignant tumors to schedule management strategies and surgical interventions.

Keywords: tumor, eyelids, conjunctiva, silver nanoparticles, biogenic synthesis, express diagnostics, ocular oncology.

For citation: Saakyan S.V., Skladnev D.A., Alekseeva A.P., Beznos O.V., Sorokin V.V. Development of a new nanobiotechnology method for the differential diagnosis of ocular adnexal tumors. Russian Journal of Clinical Ophthalmology. 2024;24(1):25–29 (in Russ.). DOI: 10.32364/2311-7729-2024-24-1-5.

Для цитирования: Саакян С.В., Складнев Д.А., Алексеева А.П., Безнос О.В., Сорокин В.В. Разработка нового нанобиотехнологического метода и его применение для дифференциальной диагностики опухолей придаточного аппарата глаза. Клиническая офтальмология. 2024;24(1):25-29. DOI: 10.32364/2311-7729-2024-24-1-5.

Введение

Опухоли придаточного аппарата глаза по распространенности среди новообразований органа зрения занимают лидирующее место и, соответственно, представляют собой социально значимую проблему в офтальмологии [1–3]. Клиническая картина этих опухолей отличается полиморфностью, в связи с чем их дифференциальная диагностика представляет определенные трудности [4–7]. Правильно установленный первоначальный диагноз играет важную роль, так как тактика лечения и объем хирургического вмешательства при доброкачественных и злокачественных новообразованиях придаточного аппарата глаза кардинально различаются [8, 9]. Особенно важно своевременное выявление злокачественных новообразований, которые представляют угрозу для жизни пациента.

Единственным методом подтверждения доброкачественного или злокачественного характера новообразования придаточного аппарата глаза является патогистологическое исследование уже удаленной опухоли [10]. Но, как известно, опухоли отличаются не только морфологически. В 2000 г. была опубликована основополагающая работа ведущих специалистов в области биологии профессоров D. Hanahan и R. Weinberg, посвященная особенностям метаболизма опухолей. Было показано, что отличительной чертой опухолевого процесса является генетически обусловленный повышенный уровень метаболизма [11]. За последние 20 лет появилось множество работ по изучению энергетического метаболизма опухолевых клеток, но на данный момент точно установлено лишь то, что метаболический профиль опухолей различается, также до конца не были определены метаболические особенности разных типов опухолей [12–14]. Это побудило нас провести поиск и разработку нового метода диагностики для оценки метаболического статуса опухолей придаточного аппарата глаза, который позволил бы установить до операции характер опухолевого процесса.

Анализ литературы показал, что биогенный синтез наночастиц ранее был применен для определения метаболической активности микроорганизмов [15, 16]. Авторами было показано, что имеется четкая корреляция между выходом биогенных наночастиц и уровнем метаболической активности микробных объектов [17]. Методологической основой метода служит генерация биогенных наночастиц de novo путем естественной фундаментальной способности живых метаболически активных клеток к восстановлению катионов [18, 19]. Мы изучили использование биогенного синтеза наночастиц серебра в оценке метаболизма опухолей придаточного аппарата глаза путем определения их восстановительной способности в отношении катионов серебра.

Цель исследования — создание и отработка нового нанобиотехнологического метода и применение его на практике для дифференциальной диагностики опухолей придаточного аппарата глаза.

Материал и методы

За период с 2021 по 2023 г. в отделении офтальмоонкологии и радиологии ФГБУ «НМИЦ ГБ им. Гельмгольца» Минздрава России проведено обследование 192 больных (105 женщин, 87 мужчин) с гистологически верифицированным диагнозом опухоли века или конъюнктивы: 79 пациентов со злокачественными новообразованиями век (n=42) и конъюнктивы (n=37) и 113 пациентов с доброкачественными опухолями век (n=54) и конъюнктивы (n=59). По поводу продолженного роста и рецидива опухоли придаточного аппарата поступили 17 (11,05%) пациентов, из них со злокачественными ново-образованиями 14 пациентов. Возраст больных на момент поступления в стационар составил от 5 до 90 лет (средний возраст 48 лет).

Всего исследованы 192 биопсийных материала из опухолей век и конъюнктивы. Контролем служили образцы здоровой ткани из того же глаза.

Все исследования проводились с согласия пациентов и были одобрены локальным этическим комитетом.

Отработка метода. Для регистрации и получения значимых различий генерации биогенных наночастиц серебра in situ требовались подбор и оптимизация основных параметров проведения реакции восстановления катионов серебра.

Генерация de novo биогенных наночастиц серебра. Образцы исследуемых тканей помещали в стерильный раствор источника катионов в асептических условиях. Генерацию наночастиц металлов проводили in situ с использованием стерильного раствора реактива Толленса (Ag(HN3)2NO3).

Были проведены измерения оптической плотности (при λ=410 нм) реакционных смесей с биогенными наночастицами серебра при использовании реактива Толленса в концентрациях 1000, 500, 250, 125, 63, 31 и 16 мкг/мл.

Оборудование. Измерение массы биоптатов проводили с использованием аналитических весов CPA225D (Sartorius, Германия), для минимизации погрешности взвешивания использовали лабораторную центрифугу LMC 4200-R. Восстановление катионов серебра и формирование de novo биогенных наночастиц проводили в термостатируемом шейкере ST-3 (Elmi, Латвия). Спектрофотометрическое определение восстановительной способности проводили на многофункциональном фотометре для микропланшетов Synergy MX (Bio-Tek, США).

Результаты спектрофотометрического определения активности генерации биогенных наночастиц серебра при длинах волн, близких к специфическим для наночастиц серебра, представляли как коэффициент (Ak) — отношение показателя оптической плотности реакционной смеси с биогенными наночастицами, сформированными в присутствии опухолей, к показателю оптической плотности реакционной смеси с биогенными наночастицами, сформированными в присутствии здоровых тканей с учетом оптической плотности раствора Ag(NH3)2NO3.

Статистическая обработка данных. Полученные результаты исследования автоматически сохранялись в виде таблицы Excel на компьютере с программной установкой Windows. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программного пакета IBM SPSS Statistics 23. Для характеристики статистических рядов распределения использовали средние значения (М) и стандартное отклонение (SD). Для оценки статистической значимости различий между группами применили критерий Стьюдента, различия считались статистически значимыми при p<0,05.

Результаты и обсуждение

Подбор оптимальной концентрации раствора источника катионов серебра. Концентрации катионов серебра в реакционной смеси, в которой генерация наночастиц биологическими объектами происходит in situ, должна быть достаточной для обеспечения формирования детектируемого количества наночастиц серебра. Были проведены измерения оптической плотности (при λ=410 нм) реакционных смесей с биогенными наночастицами серебра при использовании реактива Толленса в различных концентрациях и установлено, что максимальный уровень генерации биогенных наночастиц серебра наблюдался при концентрации раствора нитрата серебра при 31 и 63 мкг/мл. Поскольку статистически значимых различий при использовании этих двух концентраций не было (p>0,05), для дальнейших исследований была выбрана концентрация источника катионов серебра 63 мкг/мл в целях экономии реактива.

Выбор длины волны для спектрометрического определения уровня генерации биогенных наночастиц серебра. Поглощение света наночастицами определяется специфическими оптическими свойствами металла и размером наночастиц в суспензии. Возможность визуализации с помощью спектрометрии биогенных наночастиц серебра определяется рассеянием свободных электронов на поверхности наночастиц, вследствие чего плазмонная частота свободных колебаний электронов наблюдается в видимой области спектра около λ=400 нм. Исследование препаратов биогенных наночастиц серебра, генерируемых клетками биоптатов, проводили при фиксированных длинах волн 395, 400, 405, 410, 415 и 420 нм. Измерение оптической плотности образцов показало, что максимум поглощения наблюдали при длинах волн 395, 400 и 410 нм. Подобные спектральные характеристики препаратов указывают на то, что размер генерируемых de novo наночастиц серебра не превышает 30–50 нм. На основании полученных данных в дальнейшей работе для расчетов сравнительных показателей различных типов тканей была выбрана средняя длина волны 410 нм.

Оценка массы биоптатов. Хотя макроскопически размеры исследуемых биоптатов из опухолей и контрольных тканей были сопоставимы, нам требовалось нормировать образцы по массе и определить их точную массу с помощью электронных весов. Анализ значений уровня генерации наночастиц серебра (определенного спектрометрически при длине волны 410 нм) как опухолей, так и нормальных тканей после нормирования по массе не выявил значимых различий в показателях при разности масс в 2–3 раза.

Подбор времени реакции восстановления катионов клетками биоптатов. Одной из важнейших задач исследования было определение времени реакции, при котором значения оптической плотности генерируемых de novo биогенных наночастиц были бы наиболее показательными. Инкубацию для проведения реакции восстановления проводили от 5 до 40 мин с интервалами измерения уровня генерации биогенных наночастиц серебра по 5 и 10 мин. В исследовании достоверные уровни генерации наночастиц серебра фиксировали уже через 5 мин от начала реакции восстановления катионов. Наиболее показательными явились параметры оптической плотности (измеренные при длине волны 410 нм) в интервале от 10 до 20 мин. При длительности реакции восстановления более 20 мин рост величины показателей становился незначительным, а при проведении реакции восстановления более 30 мин показатели практически не изменялись. При этом после 40 мин мы наблюдали изменение цвета ткани, что могло говорить о ее разрушении. На основании проведенных измерений было определено, что в дальнейших исследованиях реакцию восстановления катионов серебра следует проводить 10 и 20 мин.

Дифференциальная диагностика доброкачественных и злокачественных опухолей век и конъюнктивы на основе нового нанобиотехнологического метода. При оценке клинической картины новообразований у пациентов обращали внимание на их переход в прилежащие структуры. У пациентов с новообразованиями век признаки активности в виде распространения на прилежащие структуры (интермаргинальное пространство) наблюдали у 34 человек, среди которых у 19 был установлен диагноз злокачественного новообразования. Опухоли конъюнктивы (доброкачественные и злокачественные) чаще всего локализовались на бульбарной конъюнктиве, среди таких опухолей распространение на прилежащие структуры (лимб и роговицу) наблюдали у 32 пациентов, из них злокачественные опухоли гистологически верифицировались у 18.

При анализе восстановительной способности опухолей век и конъюнктивы в зависимости от локализации и активности процесса (перехода на прилежащие структуры) не выявлено статистически значимых различий.

В первой части исследования была проведена оценка восстановительной способности всех типов опухолей век и конъюнктивы и восстановительной способности здоровых контрольных тканей. Значения оптической плотности реакционных смесей с биогенными наночастицами, сформированными de novo, в присутствии опухолей придаточного аппарата глаза сравнивали со значениями для соответствующих парных образцов здоровой ткани. На основании того, что уровень генерации биогенных наночастиц серебра за фиксированное время был выше в препаратах с биоптатами опухолей придаточного аппарата глаза, было установлено, что независимо от характера роста опухоли имеют более высокие по сравнению с контрольными здоровыми тканями показатели восстановительной способности.

Далее мы сравнивали восстановительную способность между доброкачественными и злокачественными опухолями придаточного аппарата глаза, так как именно возможность установить характер опухоли имеет наиболее ценную практическую значимость. Показатели восстановительной способности доброкачественных опухолей придаточного аппарата глаза в среднем составили Ak=1,5±0,2 (n=113) и не имели значимых существенных различий в зависимости от локализации опухоли (веки или конъюнктива) и типа (папилломы, невусы и т. д.). Среди злокачественных опухолей конъюнктивы (умеренно тяжелая и тяжелая интраэпителиальная неоплазия конъюнктивы, плоскоклеточный рак, меланома, лимфома) наибольшая восстановительная способность обнаружена у меланомы Ak=3,6±0,6 (n=17) (p<0,05). Среди злокачественных опухолей век не выявили статистически значимых различий разных типов опухоли. Показатели восстановительной способности при базальноклеточном раке Ak=2,9±0,3 (n=22) и при плоскоклеточном раке Ak=3,0±0,2 (n=15) отличались незначительно.

На рисунке представлены клинические примеры доброкачественных и злокачественных опухолей век и конъюнктивы и уровни их восстановительной способности.

Рисунок. Клинические примеры доброкачественных (A, B) и злокачественных (C, D) опухолей век и конъюнктивы Fig. Benign (A, B) and malignant (C, D) eyelid and conjunctival tumors

В литературе встречается все больше работ по генетически обусловленному изменению энергетического метаболизма опухолевых клеток [9]. Однако до настоящего времени нет конкретных данных о дифференциальной диагностике различных опухолей по уровню их метаболической активности.

Мы разработали новый нанобиотехнологический метод для оценки метаболической активности опухолей придаточного аппарата глаза на основе биогенного синтеза наночастиц серебра [20]. Основой разработки метода послужила способность живых метаболически активных клеток к восстановлению катионов с формированием биогенных наночастиц, доказанная на микробных моделях, где уровень синтеза клеток был пропорционален уровню их метаболической активности. Скорость формирования de novo биогенных наночастиц из катионов отражала общий уровень биосинтеза микробных клеток и служила индикатором уровня их метаболической активности [15–17].

При создании и отработке нового нанобиотехнологического метода для удобства проведения исследований и с целью получения значимых результатов исследования были оптимизированы основные методические параметры: концентрация источника катионов серебра, способ нормирования массы биоптатов, длина волны для оценки уровня генерации наночастиц серебра и время реакции восстановления катионов серебра.

Реакционные смеси, приготовляемые по протоколу нового нанобиотехнологического метода, имеют точно известный состав, за исключением тех компонентов (биогенных доноров электронов, необходимых для восстановления катионов серебра), которые привносят опухолевые клетки. Соответственно, различия при формировании биогенных нанокристаллических структур de novo строго зависели от восстановительных способностей опухолевых клеток и/или от различий биогенных секретируемых восстановителей, что позволяло оценивать метаболическую активность доброкачественных и злокачественных опухолей придаточного аппарата глаза.

С помощью нового нанобиотехнологического метода мы показали, что разные опухоли придаточного аппарата глаза имеют разную восстановительную способность в отношении катионов серебра, определенную по уровню генерации de novo биогенных наночастиц. Было впервые показано, что более высокий уровень генерации биогенных наночастиц de novo определяется у злокачественных опухолей придаточного аппарата глаза по сравнению с доброкачественными. Более того, была обнаружена наибольшая восстановительная способность у меланомы конъюнктивы. Это может объясняться тем, что меланома в качестве основного механизма обмена веществ активнее всех использует глюкозу, которая является одним из основных источников энергии опухоли [21].

Заключение

На основе фундаментальной природной способности метаболически активных клеток генерировать наночастицы серебра мы создали, отработали и использовали новый нанобиотехнологический метод экспресс-диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей придаточного аппарата глаза. Полученные данные показали, что данный метод может быть применим для получения информации на одном из важнейших диагностических этапов в офтальмоонкологии — для установления доброкачественного или злокачественного характера опухоли до операции. Ценность указанного метода заключается в возможности проводить дифференциальную диагностику доброкачественных и злокачественных опухолей придаточного аппарата глаза с целью определения тактики ведения пациента и планирования объема хирургического вмешательства.

Сведения об авторах:

Саакян Светлана Ваговна — д.м.н., профессор, член-корр. РАН, начальник отдела офтальмоонкологии и радиологии ФГБУ «НМИЦ ГБ им. Гельмгольца» Минздрава России; 105062, Россия, г. Москва, ул. Садовая-Черногрязская, д. 14/19; ORCID iD 0000-0001-8591-428X.

Складнев Дмитрий Анатольевич — д.б.н., профессор, главный научный сотрудник лаборатории выживаемости микроорганизмов ИНМИ РАН ФИЦ Биотехнологии РАН; 119071, Россия, г. Москва, Ленинский пр-т, д. 33, стр. 2; ORCID iD 0000-0001-6929-6397.

Алексеева Алена Павловна — аспирант отдела офтальмоонкологии и радиологии ФГБУ «НМИЦ ГБ им. Гельм-гольца» Минздрава России; 105062, Россия, г. Москва, ул. Садовая-Черногрязская, д. 14/19; ORCID iD 0000-0002-7568-3016.

Безнос Ольга Валерьевна — врач клинической лабораторной диагностики отдела патофизиологии и биохимии ФГБУ «НМИЦ ГБ им. Гельмгольца» Минздрава России; 105062, Россия, г. Москва, ул. Садовая-Черногрязская, д. 14/19; ORCID iD 0000-0001-7557-4955.

Сорокин Владимир Владиславович — старший научный сотрудник лаборатории выживаемости микроорганизмов ИНМИ РАН ФИЦ Биотехнологии РАН; 119071, Россия, г. Москва, Ленинский пр-т, д. 33, стр. 2; ORCID iD 0000-0002- 4166-3105.

Контактная информация: Алексеева Алена Павловна, e-mail: chonai.94@mail.ru.

Прозрачность финансовой деятельности: никто из авторов не имеет финансовой заинтересованности в представленных материалах или методах.

Конфликт интересов отсутствует.

Статья поступила 17.07.2023.

Поступила после рецензирования 07.08.2023.

Принята в печать 28.08.2023.

About the authors:

Svetlana V. Saakyan — Dr. Sc. (Med.), Professor, Corresponding Member of the RAS, Head of the Department of Ocular Oncology and Radiology, Helmholtz National Medical Research Center; 14/19, Sadovaya-Chernogryazskaya str., Moscow, 105062, Russian Federation; ORCID iD 0000-0001-8591-428X.

Dmitriy A. Skladnev — Dr. Sc. (Biol.), Professor, senior researcher of the Laboratory of Microorganism Survival, Federal Research Center "Fundamental Basis of Biotechnology"; 33, build. 2, Leninskiy av., Moscow, 119071, Russian Federation; ORCID iD 0000-0001-6929-6397.

Alena P. Alekseeva — postgraduate student of the Department of Ocular Oncology and Radiology, Helmholtz National Medical Research Center; 14/19, Sadovaya-Chernogryazskaya str., Moscow, 105062, Russian Federation; ORCID iD 0000-0002-7568-3016.

Olga V. Beznos — specialist in clinical and laboratory diagnostics of the Department of Pathophysiology and Biochemistry, Helmholtz National Medical Research Center; 14/19, Sadovaya-Chernogryazskaya str., Moscow, 105062, Russian Federation; ORCID iD 0000-0001-7557-4955.

Vladimir V. Sorokin — senior researcher of the Laboratory of Microorganism Survival, Federal Research Center "Fundamental Basis of Biotechnology"; 33, build. 2, Leninskiy av., Moscow, 119071, Russian Federation; ORCID iD 0000-0002- 4166-3105.

Contact information: Alena P. Alekseeva, e-mail: chonai.94@mail.ru.

There is no conflict of interest.

Financial Disclosure: autors have no a financial or property interest in any material or method mentioned.

Received 17.07.2023.

Revised 07.08.2023.

Accepted 28.08.2023.

1. Бровкина А.Ф., Лернер М.Ю. Рак кожи век: эпидемиология, прогноз. Опухоли головы и шеи. 2017;7(1):81–85. DOI: 10.17650/2222-1468-2017-7-1-81-85. [Brovkina A.F., Lerner M.Yu. Eyelid skin cancer: еpidemiology, prognosis. Head and Neck Tumors (HNT). 2017;7(1):81–85 (in Russ.)]. DOI: 10.17650/2222-1468-2017-7-1-81-85.
2. Бровкина А.Ф., Панова И.Е., Саакян С.В. Офтальмоонкология: новое за последние два десятилетия. Вестник офтальмологии. 2014;130(6):13–19. [Brovkina A.F., Panova I.E., Saakyan S.V. Ophthalmic oncology: achievements over the last two decades. Vestnik Oftalmologii. 2014;130(6):13–19 (in Russ.)].
3. Голованова М.А., Саакян С.В., Денисенко А.Н. Эпидемиология офтальмоонкологических заболеваний взрослого населения Нижегородской области. Опухоли головы и шеи. 2019;9(4):43–48. DOI: 10.17650/2222-1468-2019-9-4-43-48. [Golovanova M.A., Saakyan S.V., Denisenko A.N. Epidemiology of ophthalmooncology among the adult population of the Nizhny Novgorod Region. Head and Neck Tumors (HNT). 2019;9(4):43–48 (in Russ.)]. DOI: 10.17650/2222-1468-2019-9-4-43-48.
4. Саакян С.В., Иванова О.А. Меланоцитарные поражения конъюнктивы. Российская педиатрическая офтальмология. 2014;9(2):22–24. DOI: 10.17816/rpoj37556. [Saakyan S.V., Ivanova O.A. Melanocytic lesions of the conjunctiva. Rossiyskaya pediatricheskaya oftal'mologiya. 2014;9(2):22–24 (in Russ.)]. DOI: 10.17816/rpoj37556.
5. Саакян С.В. Клиническая онкология органа зрения. Эффективная фармакотерапия. 2015;30:20–27. [Saakyan S.V. Clinical oncology of visual organ. Effektivnaya farmakoterapiya. 2015;30:20–27 (in Russ.)].
6. Гришина Е.Е., Андрейченко А.М., Федотова О.Ф. Меланома конъюнктивы. Что изменилось за 55 лет? Казанский медицинский журнал. 2013;94(4):586–588. DOI: 10.17816/KMJ1977. [Grishina E.E., Andreichenko A.M., Fedotova O.F. Conjunctival melanoma. What has changed over 55 years? Kazanskiy meditsinskiy zhurnal. 2013;94(4):586–588 (in Russ.)]. DOI: 10.17816/KMJ1977.
7. Shields C.L., Shields J.A. Tumors of the conjunctiva and cornea. Indian J Ophthalmol. 2019;67(12):1930–1948. DOI: 10.4103/ijo.IJO_2040_19.
8. Саакян С.В., Харлампиди М.П., Мякошина Е.Б. и др. Радиохирургическое лечение доброкачественных опухолей век малых размеров. Сибирский научный медицинский журнал. 2019;39(4):127–136. DOI: 10.15372/SSMJ20190416. [Saakyan S.V., Kharlampidi M.P., Myakoshina E.B. et al. Radiosurgical treatment of benign small eyelid tumors. Sibirskiy nauchnyy meditsinskiy zhurnal. 2019;39(4):127–136 (in Russ.)]. DOI: 10.15372/SSMJ20190416.
9. Гришина Н.И., Нам В.А. Радиохирургическое лечение опухолей век. Саратовский научно-медицинский журнал. 2021;17(3):632–635. [Grishina N.I., Nam V.A. Radiosurgical treatment of eyelid tumors. Saratovskiy nauchno-meditsinskiy zhurnal. 2021;17(3):632–635 (in Russ.)].
10. Grossniklaus H.E., Eberhart C.G., Kivelä T.T. WHO classification of tumours of the Eye. Vol. 12. 4th ed. 2018.
11. Hanahan D., Weinberg R.A. The hallmarks of cancer. Cell. 2000;100(1):57–70. DOI: 10.1016/s0092-8674(00)81683-9.
12. Hanahan D., Weinberg R.A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 2011;144(5):646–674. DOI: 10.1016/j.cell.2011.02.013.
13. Martinez-Reyes I., Chandel N.S. Cancer metabolism: looking forward. Nat Rev Cancer. 2021;21(10):669–680. DOI: 10.1038/s41568-021-00378-6.
14. Pandey N., Lanke V., Vinod P.K. Network-based metabolic characterization of renal cell carcinoma. Sci Rep. 2020;10(1):5955. DOI: 10.1038/s41598- 020-62853-8.
15. Sorokin V.V., Skladnev D.A., Volkov V.V. et al. The pathways of silver nanoparticles formation by Mycobacterium smegmatis. Dokl Biol Sci. 2013;452:325–328. DOI: 10.1134/S0012496613050153.
16. Skladnev D.A., Vasilyeva L.V., Berestovskaya Yu.Yu. et al. Detection of microorganisms in low-temperature water environments by in situ generation of biogenic nanoparticles. Front Astron Space Sci. 2020;7:59. DOI: 10.3389/fspas.2020.00059.
17. Sorokin V.V., Pshenichnikova A.B., Kalenov S.V. et al. Comparison of the Wild-Type Obligate Methylotrophic Bacterium Methylophilus quaylei and its Isogenic Streptomycin-Resistant Mutant via Metal Nanoparticle Generation. Biol Trace Elem Res. 2020;193(2):564–573. DOI: 10.1007/s12011-019-01740-4.
18. Tan S., Chee S., Lin G., Mirsaidov U. Direct observation of interactions between nanoparticles and nanoparticle self-assembly in solution. Acc Chem Res. 2017;50(6):1303–1312. DOI: 10.1021/acs.accounts.7b00063.
19. Zhou Y., Wang H., Lin W. et al. Quantitative nucleation and growth kinetics of gold nanoparticles via model-assisted dynamic spectroscopic approach. J Colloid Interface Sci. 2013;407:8–16. DOI: 10.1016/j.jcis.2013.06.027.
20. Саакян С.В., Алексеева А.П., Складнев Д.А. и др. Способ экспресс-диагностики злокачественных опухолей век и конъюнктивы. Патент на изобретение RU 2776647C1. Опубликовано: 22.07.2022. Бюл. № 21. [Saakyan S.V., Alekseyeva A.P., Skladnev D.A. et al. The ability to expressly diagnose malignant tumors of the eyelids and conjunctiva. Patent RU 2776647С1. Date of publication: 22.07.2022. Bull. No. 21 (in Russ.)].
21. Jose C., Bellance N., Rossignol R. Choosing between glycolysis and oxidative phosphorylation: a tumor's dilemma? Biochim Biophys Acta. 2011;1807(6):552–561. DOI: 10.1016/j.bbabio.2010.10.012.